编者按：第46届圣安东尼奥乳腺癌研讨会（SABCS）将于当地时间2023年12月5日至9日在美国得克萨斯州圣安东尼奥举行。南京医科大学第一附属医院（江苏省人民医院）殷咏梅教授团队的多项研究成果将于会上进行展示，本文特进行介绍。

 

题目：高B7-H3表达伴随低PD-L1表达在三阴性乳腺癌中识别‘硬冷’肿瘤，并提示潜在的抗B7-H3治疗策略

High B7-H3 expression with low PD-L1 expression identifies armored-cold tumors suggesting potential anti-B7-H3 therapy in triple-negative breast cancer

第一作者：梅杰

 

 

背景：三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中最具侵袭性的亚型。由于具有较高的免疫原性，三阴性乳腺癌表现出较高的免疫治疗反应性。因此，利用生物标志物选择免疫治疗优势人群对于指导临床实践中的治疗选择至关重要。

 

方法：在本研究中，我们使用多个公共队列和验证队列，探索了B7-H3在三阴性乳腺癌中的表达特征和免疫相关性，并在小鼠模型中研究了B7-H3单克隆抗体的抗肿瘤作用。此外，我们还开发了一种结合B7-H3和PD-L1表达分型策略。

 

结果：B7-H3表达在三阴性乳腺癌中与免疫浸润负相关，但与胶原蛋白浸润正相关。使用单克隆抗体靶向B7-H3可显著抑制小鼠三阴性乳腺癌的生长，逆转‘硬冷’表型，并增强抗PD-1免疫治疗疗效。此外，B7-H3高表达和PD-L1低表达的患者免疫浸润水平最低，胶原蛋白水平最高，对包括化疗、免疫治疗在内的多种疗法治疗反应最低，大多属于‘硬冷’肿瘤。

 

△B7-H3/PD-L1分类与治疗反应的关系

 

结论：总体而言，本研究提供了一种基于B7-H3/PD-L1表达的新分型策略，为三阴性乳腺癌的管理提供了新的方法。

 

 

 

B7-H3（CD276）是一种Ⅰ型跨膜蛋白，属于B7免疫共刺激和共抑制家族成员，其配体尚不明确，但大多数文献认为它与T细胞的抑制有关。2001年，B7-H3首次被发现并确定为B7家族成员；同时，也证实了B7-H3与其他家族成员存在20%～27%相似性。

 

由于其在肿瘤免疫逃避中的作用，B7-H3已成为新的免疫治疗靶点。更有趣的是，研究表明B7-H3在肿瘤进展中除了免疫逃避外，在其它方面，包括侵袭和迁移、血管生成以及通过表观遗传修饰物进行基因调控上还起着重要作用。

 

目前，B7-H3靶向免疫治疗策略已经在多种癌症类型中进行了测试。B7-H3靶向策略的广泛适用性还表现在所测试的多种效应器机制：阻断抗体、放射性同位素结合、ADC、双特异性、三特异性和Fc增强的B7-H3单抗，以及B7-H3特异性CAR-T细胞。

 

本研究发现三阴性乳腺癌中B7-H3与免疫浸润负相关，但与胶原蛋白浸润正相关。同时结合经典免疫治疗标志物PD-L1表达，B7-H3高表达和PD-L1低表达的患者免疫浸润水平最低，胶原蛋白水平最高，对包括化疗、免疫治疗在内的多种疗法治疗反应最低，大多属于‘硬冷’肿瘤，即低免疫浸润高胶原蛋白浸润的亚型。尽管这类肿瘤对常规治疗疗效不好，抗B7-H3治疗或可为这类肿瘤提供新思路。

题目：顺铂通过RNFT1介导的PD-L1再循环在三阴性乳腺癌中协同免疫检查点阻断作用

Cisplatin synergizes immune checkpoint blocking through RNFT1 mediated PD-L1 recycling in Triple Negative Breast Cancer

第一作者：储嘉慧

 

 

背景：三阴乳腺癌（TNBC）约占所有乳腺癌的15%，与其他乳腺癌亚型相比恶性程度更高、复发风险更大。尽管PD-L1抑制剂已被批准应用于TNBC，但大多数TNBC患者的反应有限。已有大量临床研究证明顺铂在多种实体瘤中具有免疫协同效应，然而，其机制仍不清楚。鉴于抗PD-1或抗PD-L1免疫疗法在癌症治疗中的潜在潜力，在TNBC的发展过程中深入全面地了解PD-1和PD-L1的调节机制至关重要。

 

方法：通过抗体标记细胞膜表面PD-L1，在不同处理条件下检测膜表面PD-L1的动态变化情况。对顺铂处理后三阴乳腺癌细胞系提取膜蛋白，借由PD-L1免疫共沉淀实验和LC/MS质谱实验富集并检测与PD-L1存在相互作用的蛋白，并进一步通过生信分析发现E3连接酶RNFT1参与膜蛋白的运输及内质网-溶酶体自噬。

 

结果：顺铂早在DNA损伤和修复发生之前就影响了细胞膜PD-L1蛋白表达情况。我们用不同浓度的顺铂和不同的药物维持时间治疗MDA-MB-231。结果表明，顺铂以时间依赖的方式显著上调PD-L1的蛋白表达，这种情况发生得非常快。在24小时内，当RNA转录水平没有显著变化时，顺铂治疗可以提高PD-L1蛋白水平，这表明顺铂可能对PD-L1具有转录后调节作用。免疫荧光结果显示，顺铂处理6小时（20uM）后，PD-L1蛋白在细胞膜表面积累更多。顺铂通过诱导RNFT1介导的内质网自噬影响PD-L1的受控细胞内转运，LC/MS和免疫沉淀结果表明，在顺铂治疗过程中，E3连接酶RNFT1和膜蛋白PD-L1之间存在相互作用。使用数据库对RNFT1进行生物信息学分析，结果显示RNFT1与溶酶体内质网自噬之间存在相关性。RNFT1的过表达可以显著逆转顺铂处理诱导的膜蛋白PD-L1的表达丰度。

 

结论：我们的结果表明，顺铂治疗参与了RNFT1介导的PD-L1内吞循环通路，阻断RNFT1可能会增强PD-1/PD-L1阻断的疗效。这可能对增强三阴乳腺癌免疫治疗疗效具有一定的转化指导意义。

 

 

 

免疫治疗在乳腺癌中的疗效和应用远不及其他实体瘤，聚焦于PD-L1探究作用机制及寻找提高疗效的方法成为研究的热点和难点。我们发现肿瘤细胞表面PD-L1的动态运输明显受到顺铂的影响，与此同时也影响了局部微环境中的免疫浸润。因此本研究深入探索顺铂影响膜表面PD-L1的分子机制，旨在为进一步优化化疗联合免疫方案在“冷肿瘤”乳腺癌中的应用与转化提供理论基础。

 

题目：HER2阳性乳腺癌曲妥珠继发耐药形成过程中的表观遗传及染色质结构变化参与脂质代谢的重塑过程

Altered epigenetic modifications and genome architecture reshape lipid metabolism during secondary trastuzumab resistance formation of HER2-positive breast cancer

第一作者：段宁骏

 

 

背景：继发性曲妥珠单抗耐药严重影响了HER2阳性乳腺癌患者的生存。尽管一些研究提出了相关的分子机制，但我们对继发耐药产生过程中的细胞表型及相应的遗传变化仍缺乏认知。

 

方法：经过低剂量曲妥珠单抗长期处理HER2阳性曲妥珠敏感细胞SKBR3，我们得到了激发耐药性的SKBR3_HR细胞。在此基础上，我们比较了SKBR3与SKBR3_HR两种细胞的转录组，组蛋白H3K27me3以及H3K4me3修饰，以及染色质空间构象的差异。

 

结果：通过分析转录组数据我们发现，继发耐药细胞中PTGS1与PTGES两个基因表达的升高导致了前列腺素E2的合成发生增强，而FASN与SCD两个基因表达的下降则抑制了不饱和脂肪酸的合成。通过进一步分析与这四个基因相关的组蛋白修饰情况，我们发现H3K27me3与H3K4me3的水平在曲妥珠敏感及继发耐药细胞中均发生了改变，但H3K4me3的改变与代谢相关基因表达的变化存在更加显著的关联。其中，PTGS1与PTGES两个基因启动子区域的H3K4me3水平在耐药细胞中升高，而FASN与SCD两个基因启动子区域的H3K4me3水平在耐药细胞中降低。不仅如此，我们还发现曲妥珠单抗耐药细胞的染色质中存在着更多DNA环结构，其中PTGS1基因与邻近的染色质区域，特别是转录因子结合区域产生了更多的相互作用，这也可能是导致其转录活跃的重要因素。

 

结论：在继发性曲妥珠单抗耐药的形成过程中，组蛋白修饰以及染色质结构的变化可能是调节基因特别是脂质代谢相关基因表达的重要因素，而脂质代谢的改变也能对肿瘤细胞自身活性及肿瘤微环境产生影响。

 

 

 

曲妥珠单抗以及基于曲妥珠单抗的ADC的开发与应用显著改善了HER2阳性乳腺癌患者的生存，但耐药性的产生仍然是抗HER2治疗所面临的重要挑战。目前针对曲妥珠单抗耐药的研究主要集中在HER2与HER2相关的信号通路，而对肿瘤细胞其他特征特别是代谢途径的变化仍然缺乏认知。同时尽管基因突变、扩增以及重排是导致耐药性产生的重要遗传因素，但表观遗传相关的变化也能够显著影响相关基因的表达。我们的研究不仅揭示了一些继发性曲妥珠耐药产生过程中细胞代谢以及表观遗传的变化，也为未来的研究提供一些潜在的方向。

题目：曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌中半胱氨酸代谢相关的铁死亡敏感性

Cysteine metabolism related ferroptosis sensitivity in trastuzumab resistant HER2 positive breast cancer

第一作者：华一佳

 

 

背景：曲妥珠单抗给HER2阳性乳腺癌患者带来了显著的生存获益，但仍有约50%的患者在治疗中或治疗后出现耐药和疾病进展。目前对于曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌的代谢重编程了解甚少，探索异常的代谢通路可能将为曲妥珠单抗耐药患者带来新的治疗靶点。

 

方法：本研究对曲妥珠单抗敏感和耐药的HER2阳性乳腺癌细胞进行了转录组学、蛋白组学、代谢组学和表观基因组学的分析比对。通过CUT&Tag比较H3K4me3和H3K27me3修饰的启动子区域，采用WGBS明确DNA甲基化修饰的CpG岛区域，并借助CRISPRi对特定的CpG岛进行甲基化表达调控。

 

结果：多组学联合分析显示曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌中半胱氨酸、谷胱甘肽以及谷氨酸代谢出现明显下调，铁代谢和脂肪酸代谢显著激活。SLC7A11启动子区域的H3K4me3显著增加，且启动子CpG岛区域的DNA甲基化出现明显上调。通过dCas9-DNMT3A上调SLC7A11启动子区域的DNA甲基化能够抑制SLC7A11的表达，同时增加铁死亡敏感性。

 

 

结论：曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌中存在异常的半胱氨酸代谢，且与SLC7A11启动子区域H3K4me3和DNA甲基化存在相关性。靶向半胱氨酸代谢可能将为耐药患者提供新的治疗选择。

 

 

 

曲妥珠单抗显著改善了HER2阳性乳腺癌的生存，极大地提高了患者的生活质量，但仍有相当数量的患者在治疗的过程中或治疗后出现原发或继发性耐药，导致疾病进展和治疗失败。深入研究曲妥珠单抗耐药的分子机制仍然是克服耐药不可或缺的前提条件。

 

铁死亡与HER2乳腺癌的发生发展可能存在关联，阻断HER2阳性乳腺癌中HER2的表达能够引起氨基酸代谢及氧化还原反应紊乱。目前对于铁死亡与HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药之间的关系仍没有明确，我们探索性地对敏感与耐药细胞进行了铁死亡相关的分析检测。

 

本研究显示，曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌中组蛋白H3K4修饰以及DNA甲基化的改变可能导致了SLC7A11的异常转录，从而影响其半胱氨酸代谢和铁死亡敏感性。通过表观遗传修饰手段调控SLC7A11转录，或可影响半胱氨酸代谢并激活铁死亡发生，从而成为曲妥珠单抗耐药HER2阳性乳腺癌治疗的潜在新靶点。